western blot中膜的選擇是實驗成功的關鍵點，Western blot實驗中一般可以選擇硝酸纖維素膜(NC) 和PVDF膜，那NC膜和PVDF膜有什么區(qū)別呢?怎樣才能選擇最恰當的雜交膜進行Western blot實驗呢?
 

　　NC膜、 PVDF膜 、尼龍膜的特點
 

　　尼龍膜是較理想的核酸固相支持物，有多種類型;硝酸纖維素膜(NC膜)是目前應用*的一種固相支持物，便宜;PVDF膜介于二者之間。
 

　　就結合能力而言：尼龍膜結合DNA和RNA能力可達480-600μg/cm2，可結合短至10bp的核酸片段;硝酸纖維素膜(NC膜)結合DNA和RNA能力可達80-100μg/cm2，對于200bp的核酸片段結合能力不強;PVDF膜結合DNA和RNA能力可達125-300μg/cm2。
 

　　就溫度適應性而言：尼龍膜經烘烤或紫外線照射后，核酸中的部分嘧啶堿基可與膜上的正電荷結合;硝酸纖維素膜(NC膜)依靠疏水性相互作用結合DNA，結合不牢固;PVDF膜結合牢固，耐高溫，特別適合于蛋白印跡。
 

　　就韌性而言：尼龍膜較強;硝酸纖維素膜較脆，易破碎;PVDF膜較強。
 

　　就重復性而言：尼龍膜可反復用于分子雜交，雜交后，探針分子可經堿變性被洗脫下來;硝酸纖維素膜(NC膜)不能重復使用;PVDF膜可以重復使用。
 

　　PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜(polyvinylidene fluoride)是蛋白質印跡法中常用的一種固相支持物。PVDF膜是疏水性的，膜孔徑有大有小，隨著膜孔徑的不斷減小，膜對低分子量的蛋白結合就越牢固。大于20000的蛋白選用0.45um的膜，小于20000的蛋白選用0.2um的膜。PVDF膜在使用是需預處理，用甲醇處理的目的是活化膜上的正電基團，使其更容易與帶負電的蛋白結合。PVDF膜具有較高的機械強度，是印跡法中的理想固相支持物材料。