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科普一下葡聚糖凝膠的手工操作使用方法

更新時間:2019-01-07  |  點(diǎn)擊率:3299
   科普一下葡聚糖凝膠的手工操作使用方法

  一般剛拿到手的葡聚糖凝膠為干粉顆粒。用前,可以用20倍體積的雙蒸水泡過夜。或者沸水煮2-4個小時。記得補(bǔ)水。這樣Sephadex G/葡聚糖凝膠基本就泡好了。

  膠泡好后,將柱子準(zhǔn)備好(下篩板裝好),先用水沖洗兩次。將凝膠混勻(凝膠濃度要適當(dāng),太稀會灌得很慢,而太濃的話容易產(chǎn)生氣泡,一般1體積的膠,2-3體積的水就可以),輕輕倒入柱中,等柱中液面下降一些后,立刻補(bǔ)加,等膠體積灌得差不多時,靜置,讓膠*沉下后,再小心安置上篩板(上篩板不太好安,但多安幾次還是能夠安好的??梢韵妊b上篩板浸濕,輕輕斜蓋在上口,用吸頭壓入,關(guān)鍵是不能把氣泡擠入。再蓋平,此時如果篩板上有小量的膠,可以加水混勻再吸走)。此時不停的加水或者其他的緩沖液,不能讓柱子干了,如果干了,前面的工作就前功盡棄了,得重新灌了。

  如果有條件,可以用藍(lán)色葡聚糖(1mg/ml)檢測一下柱子是否灌得均勻。檢測方法與樣品的過柱方法相同。

  檢測合格后,就可以上樣了。樣品保證沒有沉淀,如果有的話,可以離心或者過濾去除。

  等上篩板上的液體流完,將合適的樣品量(不超過柱體積的1/10為好)全倍加入,自然流干。再加少量緩沖液,如0.5ml或者1ml,等流完再加少量緩沖液,如此三次后,就可以多加,或者一直加懣到柱口。

  如果下面接了檢測器的話就好辦,如果沒有檢測器,而目標(biāo)樣品有顏色,也比較好收集,如果又沒有檢測器,又沒有顏色,可能得分段收集了,這個誰也偷不得懶。

  等樣品收集完,就是沖上20倍柱體積的緩沖液或者水,讓小分子物質(zhì)也流出來,柱子得到再生(這個可以反向沖洗,也就是將柱子倒過來,從出口加入緩沖液,這個可以接一個合適的軟管,用一個橈杯接了水放到高處,利用重力自然往下流)。

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